远远高于排在第二的癌症。
临床试验方案的修改过程和版本要记录在案，且每次改动应记录原因。3. 适用人群及样本量适用人群为孕龄12周以上（包含12周）的孕妇。
如有特殊事项，应向国家食品药品监督管理总局医疗器械注册管理司提出申请。3.【检验原理】详细说明母体胎儿游离DNA判断染色体数量的检测原理并简介方法学原理（必要时可用图示进行）。如有意见和建议，请于2016年11月15日前将意见反馈至CMDE审评六部。由于各测序平台的技术侧重点不同，数据质量评估的项目可能存在差异，需考虑包括但不限于以下方面：文库浓度、文库片段大小、单样本总序列数（数据量）、唯一比对率、单次检测的GC gap（最高GC值与最低GC值的差值）以及错误率等。其中金标准分析如为核型分析，应明确具体结果。
2. 反应体系研究：指完成检测所涉及到的最佳反应条件的确定选择过程，包括对提取纯化步骤、游离DNA片段的末端修复、接头及标签连接、文库定量、片段扩增、测序反应的反应条件及反应体系的选择确定，涉及到对样本类型、样本用量、试剂用量、缓冲体系的选择、反应温度和时间条件及检测过程中质控方法确定的依据。已分离的血浆样本的保存条件（温度、时间长度），运输条件，处理条件（如：核酸提取前的预处理）。该公式中，影响唯一比对序列的因素包括GC含量、覆盖度等，申请人应计算并统计检验覆盖度是否在正常范围内。
另外考虑到对不同年龄段孕妇样本的阳性检出率可能存在一定差异，故建议对不同年龄段孕妇样本分别进行统计分析。10.5.4血浆分离过程中注意不要吸到中间层的白细胞。如有意见和建议，请于2016年11月15日前将意见按照附件2要求反馈至我中心审评六部。需遵循如下要点：5.1.1各临床研究机构的方案应基本一致，且保证在整个临床试验过程中遵循预定的方案实施，不可随意改动。
伦理学问题：终止妊娠应在遵守我国相关法律法规和行业规定的前提下由医师提出建议，由夫妻双方知情选择，该项检测不得作为终止妊娠的依据。适于冷冻保存的样本还应对冻融次数进行评价。
2.2文库构建试剂、文库定量试剂、测序试剂：文库构建试剂通过对片段化的DNA进行缺口补平及相应部分5‘端磷酸化和3端去磷酸化之后使用连接酶加上用于测序和分析的标签和接头，构建成可以用来测序上机的标准文库。关于《胎儿染色体非整倍体（T21、T18、T13）检测试剂盒（高通量测序法）指导原则》（征求意见稿）公开征求意见的通知各有关单位：根据我中心2016年度医疗器械技术审查指导原则编写的任务安排，我中心组织编写了《胎儿染色体非整倍体（T21、T18、T13）检测试剂盒（高通量测序法）指导原则》（附件1）。该项临床资料应当由出具数据各临床机构主管部门签章。（四）分析性能评估资料申请人应提交生产者在产品研制后，在实际生产条件下连续生产三批并对试剂盒进行的所有性能验证的研究资料，对于每项分析性能的评价都应包括具体研究目的、实验设计、研究方法、可接受标准、实验数据、统计方法等详细资料。
附件2：《胎儿染色体非整倍体（T21、T18、T13）检测试剂盒:（高通量测序法）技术审查指导原则》（征求意见稿）意见征集表填写要求：征集资料的内容包括企业信息（境内生产企业见表1、境外生产企业见表2）及意见内容（见表3），企业需按照表3要求反馈意见，并具体阐述提出意见的理由及相应的依据。统计学分析一般选用交叉四格表的形式总结本试剂盒测序结果和金标准检测结果并进行卡方或kappa检验，与金标准比对进行敏感性、特异性分析，计算阳性预测值、阴性预测值。2.6除上述材料外，还需提交不同原材料对于最终测序数据质量影响的评估材料。在参考值设定后，申请人应当选取一定数量阴、阳性临床样本进行试验验证，如与该公式不符，则应说明出现的问题及详细的数据矫正方式。
5.5特异性：主要包括其他常见染色体样本是否干扰T21、T18和T13阴、阳性的检出能力进行评价。2.3明确该产品作为产前筛查用途，其结果的确认要由产前诊断金标准进行。
如使用软件，则应明确软件名称、唯一标识号、生产厂家及医疗器械注册证书编号。6.2说明对采血管及抗凝剂的要求。
性能方面需对该试剂提取的DNA片段准确性及纯度要求，提取效率、重复性及抗干扰能力进行评估。5.2.2临床背景、病例纳入/排除标准、样本的预期选择例数及标准。5. 临床试验方案5.1申请人按照上述1-4要求并结合体外诊断试剂注册申报相关法规制定临床试验方案。片段扩增各阶段温度、时间及循环数的研究资料。（七）产品技术要求拟定产品技术要求应符合《体外诊断试剂注册管理办法》（总局令第4号）、《体外诊断试剂注册申报资料要求及说明》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）和《医疗器械产品技术要求编写指导原则》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第9号）的相关要求。2.2第二自然段，按照《体外诊断试剂说明书编写指导原则》进行，介绍临床适应症及背景，说明相关的临床或实验室诊断方法等，应介绍产前诊断金标准。
10.4.2 胎儿染色体异常中的平衡易位，嵌合型三体异常会影响检测。1.2阴性参考品：应包括采用染色体数目正常胎儿DNA片段按一定比例与正常女性血浆混合的模拟样本，以及采用其他染色体异常胎儿DNA片段按一定比例与正常女性血浆混合的模拟样本。
应针对可能存在的干扰情况进行验证。（五）参考值的确定资料由于目前胎儿染色体非整倍体T13、T18、T21的阳性值测算存在多种计算方式，且更好的算法和数据处理方式仍在不断开发中，因此，如申请人选择了某一算法作为参考值的计算方式，则应详细阐述选择该算法作为依据的原因（如权威文献、行业共识等），并详细阐述计算公式和各参数代表的意义并提交采用一定数量真实临床样本对参考值的试验验证资料。
2.2.2核苷酸序列：应提交相应的序列组成和纯度信息，序列准确度及稳定性资料。研究方法包括前瞻性研究也可纳入部分回顾性研究。
测序数据质量的评估指标等。该产品已有国家参考品发布，在注册检测时应使用高通量测序用外周血胎儿染色体非整倍体（T21、T18和T13）国家参考品进行（九）产品说明书产品说明书的格式应符合《体外诊断试剂说明书编写指导原则》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第17号）的要求，境外产品的中文说明书除格式要求外，其内容应尽量保持与原文说明书的一致性，翻译力求准确且符合中文表达习惯。三、基本要求（一）综述资料综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、有关生物安全性的说明、有关产品主要研究结果的总结和评价以及其他等内容，其中其他包括同类产品在国内外批准上市的情况，应着重从方法学及检出限等方面写明拟申报产品与目前市场上已获批准的同类产品之间的主要区别。可以在合理的温度范围内选择温度点（温度范围），每间隔一定的时间段即对储存样本进行全性能的分析验证，从而确认样本的效期稳定性。
引物设计应提交引物设计原则及选择对比依据。4.【主要组成成分】说明试剂盒所包含组分的名称、数量、比例或浓度等信息，说明不同批号试剂盒中各组分是否可以互换。
具体要求如下：2.1血浆游离DNA提取纯化试剂：该试剂分类界定为一类试剂，无论申报产品中包含或是配合使用，申请人均应提供该试剂提取纯化原理、生产厂家及货号或一类备案凭证号，提交详细组成成分资料。（八）注册检测根据总局第5号令要求，首次申请注册的第三类产品应在国家食品药品监督管理局认可的、具有相应承检范围的医疗器械检测机构进行连续三个生产批次样品的注册检测。
1.4 Mean%chrNreference：参照样品第N条染色体比例平均值。适用人群：本指导原则预期用途为对孕周12周（包含12周）以上的孕妇进行产前筛查，其结果不能代表对孕妇怀有三体胎儿的确认，产前筛查的结果必须要经过产前诊断进行确认。
8.2文库构建：末端修复、接头连接、缺口修复、PCR扩增。如有条件，申请人应选择不同的实验室进行重复实验以对室间精密度进行评价。（六）稳定性研究资料稳定性研究资料应包括研究方法的确定依据、具体的实施方案、详细的研究数据以及结论。当对怀有T21胎儿的母体血浆游离DNA数据进行分析时，其21号染色体游离DNA总数会有小比例的升高，通过统计学算法区分这一微小差异来实现利用cffDNA进行胎儿染色体非整倍体的产前筛查。
本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。应将临床评价的试验结果纳入。
样本量依据统计学及胎儿染色体三体发病率计算，根据其临床预期用于产前筛查的用途，建议总例数不少于10000例，除了选择前瞻性样本外，也可以包括回顾性样本。其对应的分别21-三体综合征（又称唐氏综合征，先天愚型或Down综合征）、18-三体综合征（又称Edwards综合征）和13-三体综合征（又称Patau综合征），发病率分别约为1/700、1/6000、1/10000，患儿绝大多数存在严重智力障碍及器官畸形，生活无法自理，不仅影响儿童的生命健康和生活质量，同时影响经济社会的健康可持续发展。
配制工作液的各种原材料及其配比应符合要求，原材料应混合均匀，配制过程应对关键参数进行有效控制。8.4测序模板的制备：混合文库、PCR、模板富集。